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分子伴侣介導的自噬研究工具

分子伴侣介導的自噬(chaperone-mediated autophagy,CMA)主要通過分子伴侣識別蛋白質序列上的一段特殊基序,將蛋白轉運到溶酶體內進行降解的過程。CMA可以降解受損或變異的蛋白質,對於維持細胞內蛋白質的穩態具有重要作用;也可以降解脂質和葡萄糖代謝、細胞周期、DNA 修復等過程中的關鍵蛋白而發揮調節作用。通常情況下,肝臟、肾臟、大腦等組織或培養物中幾乎所有不同細胞類型中均可以檢測到一定程度的CMA活性,而細胞應激狀態下則最大程度地激活了這一途徑,饑餓、氧化劑、促氧化劑和蛋白質變性毒素等均會引起CMA的活化。CMA通過選擇性識別和降解細胞過程中的某些蛋白,對細胞活動做到精確調控,逐漸成為自噬研究的熱點內容。另外CMA與代謝紊亂、神經變性、免疫缺陷、糖尿病及癌癥等重大疾病也有很大的相關性,高效的CMA活性監測工具可為其在疾病中的潛在性能研究供應極大的便利。

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KFERQ-PAmCherry1 檢測CMA活性 慢病毒、腺病毒、腺相關病毒
PAmCherry1-KFERQ-NE
分子伴侣介導的自噬研究工具

KFERQ-PAmCherry1和PAmCherry1-KFERQ-NE病毒工具:

PAmCherry1是一種光活化蛋白,本身無光,需在405nm波長的光暴露5-10分鐘進行活化後,才可被激活發出紅色荧光(激發564nm,發射595nm)。使用這類荧光蛋白可降低高自發荧光或累積自發荧光色素沈積物對細胞觀察的影響。KFERQ-PAmCherry1借助分子伴侣所識別底物基序KFERQ與光活化蛋白PAmCherry1融合,使其轉化為CMA底物,當靶向溶酶體時便可通過觀察紅色荧光斑點數量來檢測活細胞中的CMA活性。

註:“NE”是蛋白標簽,可用於蛋白表達檢測。


分子伴侣介導的自噬研究工具

PMID: 21750540(KFERQ-PAmCherry1工具)


分子伴侣介導的自噬研究工具

PMID: 30983487(PAmCherry1-KFERQ-NE工具)



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