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1、懸浮細胞準備:腺病毒建穩轉細胞系前,請確保目的細胞狀態良好、無支原體汙染。腺病毒感染的時候細胞匯合率為40%~60%間為宜。
2、感染細胞最佳MOI的測定:MOI(感染復數)是指每個細胞感染的病毒數。
註:腺病毒對於不同種類不同來源的細胞,其最適MOI各有差別。對於懸浮細胞,腺病毒MOI一般以30, 100, 300, 1000, 2000的比例遞增進行梯度摸索,相比於貼壁細胞,懸浮細胞的腺病毒MOI需求更高,MOI梯度摸索建議用96孔板進行以節省病毒和細胞。
3、MOI對應病毒體積的換算
感染時細胞數(一般以傳代計數細胞數×2計算)×MOI=病毒個數;則加入的病毒體積數=病毒個數/病毒滴度
懸浮細胞專用腺病毒感染懸浮細胞:
病毒: Ads-GFP,1×10¹º PFU/ml
感染細胞:OCI-LY1、K562、HL-60、L2110
檢測方法:感染72 h後荧光顯微鏡檢測
懸浮細胞專用腺病毒Ads感染小鼠原代CD4+ T細胞:
細胞:小鼠原代CD4+ T細胞
刺激方式:CD3/CD28抗體和IL-2激活48h
病毒:Ads-GFP, 1×1010 PFU/ml
懸浮細胞專用腺病毒Ads感染人原代CD4+ T細胞:
細胞:人原代CD4+ T細胞
刺激方式:CD3/CD28抗體和IL-2激活48h
病毒:Ads-GFP, 1×1010 PFU/ml
使用方式:MOI=100
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