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腺相關病毒(AAV)包裝

Adeno-Associated Virus
腺相關病毒(Adeno-Associated Viral Vector,AAV)屬於微小病毒科( parvovirus),為無包膜的單鏈線狀 DNA 病毒。AAV 的基因組約 4700bp,包括上下遊兩個開放讀碼框架(ORF),位於分別由 145 個核苷酸組成的 2 個反向末端重復序列(ITR)之間。 由於腺相關病毒具有宿主範圍廣、安全性高、免疫原性低、表達穩定和物理性質穩定等優點,已被廣泛地應用於基礎研究和臨床試驗中,並且腺相關病毒載體已成為世界上最常用的基因治療載體之一。
腺相關病毒有如下特點:
安全
AAV不參與任何疾病的發生,已經用於臨床疾病的治療。
表達周期久
AAV免疫原性低,基因可持續表達半年以上。
動物水平感染
AAV滴度高達1013vg/ml以上,在體組織感染能力強。
腺相關病毒商品與效勞
效勞類型供應商品 滴度 適用範圍
常規基因過表達/幹擾
CRISPR/Cas9 AAV
circRNA/LncRNA/miRNA過表達和幹擾定製
光遺傳、化學遺傳、鈣指示劑、跨血腦屏障AAV、逆行示蹤AAV
組織特異性DIO AAV、Cre重組酶
常規啟動子/血清型AAV 1012v.g/ml或1013v.g/ml 適用於大部分組織感染

特異性啟動子/血清型AAV 1012v.g/ml或1013v.g/ml 適用於特定的靶器官/組織感染,特異性強
效勞流程
腺相關病毒包裝效勞流程



品質標準
檢測項目 檢測方法 檢測結果
支原體 PCR 陰性
內毒素 LAL 合格
細菌 培養法 陰性
真菌 培養法 陰性
活性滴度 qPCR ≥10^12 v.g/ml
載體選擇(常用)
編號 調控方式 元件順序 原核抗性 荧光標記 啟動子
AAV001 過表達 pHBAAV-CMV-MCS-3flag-T2A-ZsGreen Ampicillin ZsGreen CMV
AAV003 過表達 pHBAAV-CMV-MCS-3flag-EF1-ZsGreen Ampicillin ZsGreen CMV
AAV004 過表達 pHBAAV-CAG-MCS-T2A-ZsGreen Ampicillin ZsGreen CAG
AAV006 過表達 pHBAAV-CAG-MCS-T2A-mCherry Ampicillin mCherry CAG
AAV026 過表達 pHBAAV-CMV-MCS-T2A-mCherry Ampicillin mCherry CMV
AAV071 過表達 pHBAAV-CMV-MCS-3flag Ampicillin CMV
AAV123 過表達 pHBAAV-CMV-MCS-P2A-Luc2 Ampicillin Luciferase CMV
AAV007 過表達cre誘導 pHBAAV-CAG-DIO-MCS-T2A-ZsGreen Ampicillin ZsGreen CAG
AAV008 過表達cre誘導 pHBAAV-CAG-DIO-MCS-T2A-mCherry Ampicillin mCherry CAG
AAV027 過表達cre誘導 pHBAAV-CMV-DIO-MCS Ampicillin CMV
AAV028 過表達cre誘導 pHBAAV-CMV-DIO-MCS-T2Am-ZsGreen Ampicillin ZsGreen CMV
AAV030 過表達cre誘導 pHBAAV-CAG-DIO-MCS Ampicillin CAG
AAV020 幹擾 pHBAAV-U6-MCS-CMV-mCherry Ampicillin mCherry U6
AAV021 幹擾 pHBAAV-U6-MCS-CMV-EGFP Ampicillin EGFP U6
AAV036 幹擾 pHBAAV-U6-MCS-CMV-ZsGreen Ampicillin ZsGreen U6
AAV074 幹擾 pHBAAV-U6-MCS-CMV-eRFP Ampicillin eRFP U6
AAV121 幹擾 pHBAAV-U6-MCS Ampicillin U6
AAV122 幹擾 pHBAAV-U6-MCS-CMV-Luc Ampicillin Luciferase U6
AAV023 Cas9/gRNA pHBAAV-CMV-Sacas9-U6-gRNA Ampicillin U6
漢恒AAV血清型推選
感染部位 推選血清型
心臟 AAV9
肝臟 AAV8/AAV9
全腦(跨血腦屏障) AAV-BBB
大腦(局部) AAV9/AAV2/AAV5
逆行示蹤 AAV-Retro
脊髓 AAV5/AAV1/AAV9
脂肪 AAV9
骨骼肌 AAV9
眼睛 AAV2/AAV-DJ
肺臟 AAV6
肾臟 AAV2/AAV9
腸道 AAV1/AAV5
血管(內皮為主) AAV1/AAV5
胰腺 AAV8
特異性啟動子
<
組織 啟動子名稱 啟動子特性
神經 hSyn 神經元特異性啟動子
mecp2 較短的神經元特異性啟動子
TUBA1A (Tα1) 早期神經元特異性啟動子
Nms 神經元特異性啟動子
c-fos 興奮神經元特異性啟動子
CaMKII 前腦谷氨酸能神經元特異性啟動子
hVGAT GABA能神經元/中間神經元特異性啟動子
TH 多巴胺神經元特異性表達啟動子
gfaABC1D (minimal GFAP) 星形膠質細胞特異性啟動子
CD68 活化狀態的小膠質細胞特異性啟動子
ibal 活化和靜息狀態的小膠質細胞特異性啟動子
CX3CR1 小膠質細胞特異性啟動子
TMEM119 小膠質細胞特異性啟動子
CNP (NPPC) 少突膠質細胞或施萬細胞特異性啟動子
MBP 少突膠質細胞特異性啟動子
PLP少突膠質細胞特異性啟動子
Pdgfra 少突膠質前體細胞特異性啟動子
NG2 少突膠質前體細胞特異性啟動子
Pirt 感覺神經元特異性啟動子
ALDH1L1 丘腦星形膠質細胞特異性啟動子
心臟 cTNT 心肌細胞特異性啟動子
POSTN 心肌成纖維細胞特異性啟動子
COL1A2成纖維細胞特異性啟動子
TCF21 心肌成纖維細胞特異性啟動子
ANF心房特異性啟動子
肌肉 TCF4 胫前肌肌肉特異性啟動子
SM22a 平滑肌特異性啟動子
MHCK7 肌肉特異性啟動子
ACTA1 (synthesized Spc5-12) 肌細胞特異性啟動子
MYOG
心肌成纖維細胞特異性啟動子
SP-C (SFTPC) 肺上皮細胞特異性啟動子
肝臟 TBG 肝臟特異性啟動子

ALB肝臟特異性啟動子

Apoe肝臟特異性啟動子

Hlp人源肝臟特異性啟動子

LRAT肝星狀細胞特異性啟動子

oit3 肝窦內皮細胞特異性啟動子
肾臟 nphs1 肾臟足細胞特異性啟動子
nphs2 肾臟足細胞特異性啟動子
Ksp-cadherin 肾小管上皮細胞特異性啟動子
SGLT2近端肾小管上皮細胞特異性啟動子
Ggt1 近端肾小管特異性啟動子
胰腺 padx1(pdx1) 胰腺特異性啟動子
Insulin2 胰腺特異性啟動子
腸道Villin腸道特異性啟動子
脂肪 FABP4 (aP2) 脂肪細胞特異性啟動子
adiponectin 脂肪細胞特異性啟動子
UCP1 棕色脂肪細胞特異性啟動子
Myf5 前體脂肪細胞特異性啟動子(骨骼肌系)
內皮 TIE1 內皮細胞特異性啟動子

TIE2內皮細胞特異性啟動子

CDH5 內皮細胞特異性啟動子

ICAM2 內皮細胞特異性啟動子
視網膜 rpe65 視網膜特異性啟動子
Arr3 視網膜視錐細胞特異性啟動子
hrk視網膜視錐細胞和視桿細胞特異性啟動子
RLBP1視網膜特異性啟動子
前列腺 DD3 前列腺癌細胞特異性啟動子
皮膚 Keratin14 皮膚表皮細胞特異性啟動子
甲狀腺TTF1甲狀腺濾泡細胞/肺腺癌特異性啟動子
巨噬細胞(造血) PF4 巨核細胞特異性啟動子
巨噬細胞(免疫)F4/80巨噬細胞特異性啟動子

sp146巨噬細胞特異性啟動子
淋巴lyve1淋巴內皮特異性啟動子

PROX1淋巴內皮細胞特異性啟動子
白血病細胞WT1白血病細胞特異性啟動子
腫瘤TERT腫瘤特異性啟動子
COL2A1 軟骨細胞特異性啟動子
幹細胞 Nanog 多性能幹細胞啟動子
漢恒特異性血清型AAV:
血清型名稱 對應特異性細胞
AAV-shH10 視網膜穆勒細胞
AAV-Vec 內皮細胞
AAV-MG小膠質細胞
AAV-MG1.2小膠質細胞
AAV-br1 腦血管內皮細胞特異
AAV-BI30 腦部血管內皮
AAV-eVEC 外周血管內皮
AAV-anc80L 視網膜,內耳
AAV-ie 內耳
AAV-BBB 穿過血腦屏障
AAV-cap-B10腦部
AAV-GL 視網膜
AAV-NN 視網膜
AAV-BLS 膀胱
AAV4
AAV7
AAV11
AAV-PAN胰腺
AAV-6.2FF
AAV-Ark313T細胞
AAV-SCH9神經幹細胞
AAV-GEC肾小球
常見問題
腺相關病毒(AAV)是否可以用於感染細胞?

因其在快速分裂的細胞系中表達能力有限,一般不推選使用腺相關病毒感染細胞。

部分血清型也可進行細胞感染,例如AAV-DJ。

不同的腺相關病毒(AAV)血清型的主要區別是什麽?

幾乎所有的AAV病毒骨架都是來源AAV2,不同血清型的差異在於包裹AAV遺傳物質的蛋白外殼(Capsid),比如AAV5型,AAV8型和AAV9型,也可以分別標記為AAV2/5, AAV2/8, AAV2/9。其中2代表骨架來源於AAV2,血清型為5,8和9。

腺相關病毒(AAV)的包裝容量一般多大?
腺相關病毒的包裝容量(兩個ITR之間的片段大小)通常不超過4.5kb,去除啟動子、荧光標記、轉錄終止信號polyA等元件之外,外源基因的容量一般在2k左右。
AAV感染實例
腺相關病毒感染實例

顧客發表文獻節選
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LECT2, a Ligand for Tie1, Plays a Crucial Role in Liver Fibrogenesis
(雜誌:CELL,IF=41.582,南方醫科大學)
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(雜誌:CELL,IF=41.582,華東師範大學)
Neuraminidase 1 is a driver of experimental cardiac hypertrophy
(雜誌:European Heart Journal,IF=29.983,中國藥科大學)
Targeting E3 Ubiquitin-Ligase WWP1 Prevents Cardiac Hypertrophy Through Destabilizing DVL2 via Inhibition of K27-Linked Ubiquitination
(雜誌:CIRCULATION,IF=29.690,中國航天員空間醫學基礎與應用國家重點實驗室)
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(雜誌:Molecular Cancer,IF=27.401,浙江大學附屬邵逸夫醫院)
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TRIB3 Interacts With β-Catenin and TCF4 to Increase Stem Cell Features of Colorectal Cancer Stem Cells and Tumorigenesis
(雜誌:Gastroenterology,IF=22.682,中國醫學科學院北京協和醫學院)
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