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效勞類型 | 供應商品 | 滴度 | 適用範圍 |
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常規基因過表達/幹擾腺病毒
miRNA sponge/antago腺病毒
circRNA/LncRNA過表達和幹擾腺病毒
CRISPR/Cas9腺病毒定製
腺病毒純化效勞
腺病毒現貨商品
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普通腺病毒 | 1010PFU/ml或1011PFU/ml | 適用於普通細胞系感染 |
懸浮細胞專用腺病毒Ads | 1010PFU/ml或1011PFU/ml | 專為懸浮細胞特殊策劃,兼容普通細胞和原代細胞,效率更高 |
編號 | 調控方式 | 元件順序 | 原核抗性 | 真核抗性 | 荧光標記 | 啟動子 |
---|---|---|---|---|---|---|
Adeasy014 | 過表達 | pAdEasy-EF1-MCS-CMV-EGFP | Kanamycin | 無 | EGFP | EF1 |
Adeasy015 | 過表達 | pAdEasy-EF1-MCS-CMV-mCherry | Kanamycin | 無 | mCherry | EF1 |
Adeasy018 | 過表達 | pAdEasy-CMV | Kanamycin | 無 | 無 | CMV |
Adeasy022 | 過表達 | pAdEasy-CMV-3flag | Kanamycin | 無 | 無 | CMV |
Adeasy023 | 過表達 | pAdEasy-EF1-MCS-3flag-CMV-EGFP | Kanamycin | 無 | EGFP | EF1 |
Adeasy024 | 過表達 | pAdEasy-EF1-MCS-CMV-LUC | Kanamycin | 無 | Luciferase | EF1 |
Adeasy027 | 過表達 | pAdEasy-EF1-MCS-CMV-eRFP | Kanamycin | 無 | eRFP | EF1 |
Adeasy030 | 過表達 | pAdEasy-EF1-MCS-3flag-CMV-mCherry | Kanamycin | 無 | mCherry | EF1 |
Adeasy032 | 過表達 | pAdeasy-EF1-CircRNA-CMV-EGFP | Kanamycin | 無 | EGFP | EF1 |
Adeasy019 | 幹擾 | pAdEasy-U6 | Kanamycin | 無 | 無 | U6 |
Adeasy020 | 幹擾 | pAdEasy-U6-CMV-EGFP | Kanamycin | 無 | EGFP | U6 |
Adeasy021 | 幹擾 | pAdEasy-U6-CMV-mCherry | Kanamycin | 無 | mCherry | U6 |
Adeasy028 | 幹擾 | pAdEasy-U6-CMV-eRFP | Kanamycin | 無 | eRFP | U6 |
Adeasy026 | Cas9/gRNA | pAdEasy-U6-CMV-Cas9-2A-eRFP | Kanamycin | 無 | eRFP | U6 |
Adeasy043 | Cas9/gRNA | pAdEasy-U6-scaffold-CMV-Cas9-T2A-ZsGreen | Kanamycin | 無 | ZsGreen | U6 |
主要根據實驗目的不同來選擇,可以參考以下幾個方面來判斷:
(1) 插入目的序列的大小:慢病毒載體包裝容量一體建議在3k以內,超過可能會影響病毒滴度;腺病毒包裝容量可達8k;若目的序列大小超過載體容量,滴度則會隨着目的序列大小增加而降低;
(2) 是否需要構建穩轉細胞株:慢病毒載體可以將外源基因隨機整合到目的細胞基因組中並穩定遺傳,即可用於構建穩轉細胞株,當然做瞬時轉染也可以;而腺病毒不整合基因組,只適用於瞬時轉染;
(3) 目的細胞類型:像神經細胞、一些原代細胞等感染難度比較大的細胞,且後續無需建立穩轉株,推選使用腺病毒,其感染效率要遠高於慢病毒。
詳細可參考:基因調控工具選擇指南>>
腺病毒載體的包裝系統主要有兩種:AdMax系統和Adeasy系統。這兩種包裝系統都是二質粒系統,即需要一個骨架質粒和一個攜帶外源基因的穿梭質粒;都需要能夠表達E1基因的293A細胞作為包裝細胞,另外293A細胞為單層細胞有利於空斑的形成和觀察。AdMax和Adeasy的主要區別在於病毒基因組重組的過程不同:
AdMax系統:病毒基因組重組過程簡單,骨架質粒和穿梭質粒直接轉染至293A細胞中重組即可。
Adeasy系統:該系統是在細菌中進行的。首先骨架質粒整合到BJ5183感受態細胞中,再將穿梭質粒線性化後轉化到BJ5183,二者則在BJ5193中重組,驗證重組效果後,轉至Stbl3感受態細胞大量製備重組質粒,再線性化後,即可轉入包裝細胞進行包毒。
未純化的病毒液中含有缺損病毒顆粒、細胞碎片、培養基等雜質,當被註入動物體內,會引免疫反應,所以在需要做動物實驗時,通常需要對腺病毒進行純化。而進行細胞實驗,可使用未純化的腺病毒。
情形可以參考幹貨文章《動物實驗用腺病毒是否有必要純化?》
漢恒生物推選采用PEG8000沈澱-CsCl密度梯度離心-透析聯用法進行腺病毒純化。
腺病毒純化的滴度可達到1011PFU/ml,用於動物實驗。
小鼠眼部結膜下註射純化腺病毒Ad-SIRT1和對照AdGFP:PFU=1011/ml,3 μl/single eye;48hr後觀察GFP表達。
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