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腺病毒包裝

Adenovirus Packaging
重組腺病毒(AdV)是一種復製缺陷的腺病毒載體系統,在基因治療、基礎生命科學研究等範圍被廣泛應用。目前常用的腺病毒載體基於人腺病毒5型(Ad5),其基因組是36 kb長的線性雙鏈DNA。腺病毒可通過自身的纖維(fiber)和細胞表面的受體結合被內吞進入細胞,然後從內吞體(endosome)轉移到細胞質和細胞核內,借助細胞的轉錄和翻譯機器啟動病毒的復製組裝。一個完整的病毒生活周期會引發細胞死亡從而釋放出病毒粒子。
腺病毒特點
感染範圍廣
腺病毒可適用於普通細胞系的感染,也可用於懸浮細胞、原代細胞等。
感染效率高
腺病毒的滴度可高達1011PFU/ml,感染效率高,可感染懸浮細胞、原代細胞等。
載體容量大
腺病毒的載體容量較大,最高可達8kb。
腺病毒商品與效勞
效勞類型供應商品 滴度 適用範圍
常規基因過表達/幹擾腺病毒
miRNA sponge/antago腺病毒
circRNA/LncRNA過表達和幹擾腺病毒
CRISPR/Cas9腺病毒定製
腺病毒純化效勞
腺病毒現貨商品
普通腺病毒 1010PFU/ml或1011PFU/ml 適用於普通細胞系感染

懸浮細胞專用腺病毒Ads 1010PFU/ml或1011PFU/ml 專為懸浮細胞特殊策劃,兼容普通細胞和原代細胞,效率更高
效勞流程
腺病毒包裝效勞流程



品質標準
檢測項目 檢測方法 檢測結果
支原體 PCR 陰性
內毒素 LAL 合格
細菌 培養法 陰性
真菌 培養法 陰性
活性滴度 感染法 ≥10^10 PFU/ml
載體選擇(常用)
編號 調控方式 元件順序 原核抗性 真核抗性 荧光標記 啟動子
Adeasy014 過表達 pAdEasy-EF1-MCS-CMV-EGFP Kanamycin EGFP EF1
Adeasy015 過表達 pAdEasy-EF1-MCS-CMV-mCherry Kanamycin mCherry EF1
Adeasy018 過表達 pAdEasy-CMV Kanamycin CMV
Adeasy022 過表達 pAdEasy-CMV-3flag Kanamycin CMV
Adeasy023 過表達 pAdEasy-EF1-MCS-3flag-CMV-EGFP Kanamycin EGFP EF1
Adeasy024 過表達 pAdEasy-EF1-MCS-CMV-LUC Kanamycin Luciferase EF1
Adeasy027 過表達 pAdEasy-EF1-MCS-CMV-eRFP Kanamycin eRFP EF1
Adeasy030 過表達 pAdEasy-EF1-MCS-3flag-CMV-mCherry Kanamycin mCherry EF1
Adeasy032 過表達 pAdeasy-EF1-CircRNA-CMV-EGFP Kanamycin EGFP EF1
Adeasy019 幹擾 pAdEasy-U6 Kanamycin U6
Adeasy020 幹擾 pAdEasy-U6-CMV-EGFP Kanamycin EGFP U6
Adeasy021 幹擾 pAdEasy-U6-CMV-mCherry Kanamycin mCherry U6
Adeasy028 幹擾 pAdEasy-U6-CMV-eRFP Kanamycin eRFP U6
Adeasy026 Cas9/gRNA pAdEasy-U6-CMV-Cas9-2A-eRFP Kanamycin eRFP U6
Adeasy043 Cas9/gRNA pAdEasy-U6-scaffold-CMV-Cas9-T2A-ZsGreen Kanamycin ZsGreen U6
常見問題
感染細胞,腺病毒和慢病毒該怎麽選擇?

主要根據實驗目的不同來選擇,可以參考以下幾個方面來判斷:

1) 插入目的序列的大小:慢病毒載體包裝容量一體建議在3k以內,超過可能會影響病毒滴度;腺病毒包裝容量可達8k;若目的序列大小超過載體容量,滴度則會隨着目的序列大小增加而降低;

2) 是否需要構建穩轉細胞株:慢病毒載體可以將外源基因隨機整合到目的細胞基因組中並穩定遺傳,即可用於構建穩轉細胞株,當然做瞬時轉染也可以;而腺病毒不整合基因組,只適用於瞬時轉染;

3) 目的細胞類型:像神經細胞、一些原代細胞等感染難度比較大的細胞,且後續無需建立穩轉株,推選使用腺病毒,其感染效率要遠高於慢病毒。

詳細可參考:基因調控工具選擇指南>>

 

腺病毒包裝系統AdMax和Adeasy的區別?

腺病毒載體的包裝系統主要有兩種:AdMax系統和Adeasy系統。這兩種包裝系統都是二質粒系統,即需要一個骨架質粒和一個攜帶外源基因的穿梭質粒;都需要能夠表達E1基因的293A細胞作為包裝細胞,另外293A細胞為單層細胞有利於空斑的形成和觀察。AdMax和Adeasy的主要區別在於病毒基因組重組的過程不同:

AdMax系統:病毒基因組重組過程簡單,骨架質粒和穿梭質粒直接轉染至293A細胞中重組即可。

Adeasy系統:該系統是在細菌中進行的。首先骨架質粒整合到BJ5183感受態細胞中,再將穿梭質粒線性化後轉化到BJ5183,二者則在BJ5193中重組,驗證重組效果後,轉至Stbl3感受態細胞大量製備重組質粒,再線性化後,即可轉入包裝細胞進行包毒。

腺病毒可以感染動物嗎?
純化的腺病毒滴度可達滴度可達到1011PFU/ml,可以用於動物實驗。
腺病毒是否需要純化,純化方式是什麽?

未純化的病毒液中含有缺損病毒顆粒、細胞碎片、培養基等雜質,當被註入動物體內,會引免疫反應,所以在需要做動物實驗時,通常需要對腺病毒進行純化。而進行細胞實驗,可使用未純化的腺病毒。

情形可以參考幹貨文章《動物實驗用腺病毒是否有必要純化?》

漢恒生物推選采用PEG8000沈澱-CsCl密度梯度離心-透析聯用法進行腺病毒純化。

腺病毒感染實例

腺病毒感染貼壁細胞

腺病毒感染貼壁細胞

腺病毒轉染

自噬腺病毒轉染

mRFP-GFP-LC3自噬雙標腺病毒感染HCT116和HT29, 漢恒顧客2017年發表於CELL,IF>30


腺病毒感染原代細胞

腺病毒感染原代細胞


腺病毒用於動物實驗

腺病毒純化的滴度可達到1011PFU/ml,用於動物實驗。


腺病毒用於動物實驗


小鼠眼部結膜下註射純化腺病毒Ad-SIRT1和對照AdGFP:PFU=1011/ml,3 μl/single eye;48hr後觀察GFP表達。



顧客發表文獻節選
Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy
(雜誌:CELL,IF=41.582,上海交通大學附屬仁濟醫院)
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(雜誌:CELL,IF=41.582,華東師範大學)
TRIB3 Promotes APL Progression through Stabilization of the Oncoprotein PML-RARa and Inhibition of p53-Mediated Senescence
(雜誌:Cancer Cell,IF=31.743,中國醫學科學院)
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(雜誌:NATURE MEDICINE,IF=30.641,武漢大學)
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