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化學修飾的熱啟動DNA聚合酶,在室溫時酶活力被完全抑製,避免非特異性擴增。95oC加熱數分鐘後抑製失效,Taq酶恢復活力。
SYBR Green I遊離狀態下幾乎無荧光,與雙鏈DNA非特異性結合後產生很強的荧光。反應體系中SYBR Green I的荧光強度,與雙鏈DNA的含量成正比,因此可用於目的基因的定量。
貨號 | 商品名稱 | 商品規格 |
---|---|---|
HB-START-1000 | HBStart Green qPCR Premix | 1mL |
試劑 | 使用量 |
---|---|
HBStart Green qPCR Premix | 5μL |
正向引物(10μM) | 0.4μL |
反向引物(10μM) | 0.4μL |
DNA模板 | XμL |
Nuclease-Free Water | To 10μL |
註:推選模板加樣量為1~2μL,如模板類型為未稀釋cDNA原液,模板添加量不應超過總反應體系的10%。不同種類DNA模板中含有的靶基因拷貝數目不同,必要時可進行梯度稀釋,以確定最佳的DNA模板添加量。
2、PCR程序
高擴增效率選擇三步法;高特異性選擇兩步法。
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