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然而,T細胞轉染異常困難,普通的DNA質粒很難轉染,即使是病毒介導的基因轉染操作,也有不少難題,主要體現在幾個方面:
1、常規的慢病毒、逆轉錄病毒,由於1)T細胞膜上受體的不穩定;2)非激活的T細胞本身無增殖能力;3)T細胞內部有阻礙反轉錄的機製等原因而導致慢病毒和逆轉錄病毒的T細胞感染能力偏弱,需要多次重復感染,且對於實驗操作的條件要求十分苛刻。
2、體外培養的T細胞本身十分敏感且脆弱,慢病毒感染對細胞的狀態影響較大。
3、T細胞是懸浮細胞,進一步增大了病毒有效感染的難度。
漢恒生物研制適用於原代T細胞的病毒有:T細胞專用慢病毒、懸浮細胞專用的腺病毒(Ads)。
1、高效感染免疫系統和造血系統等來源的可分裂型細胞
2、病毒感染具有人鼠細胞特異性。
3、可用來構建穩轉細胞系
細胞:人原代CD4+ T細胞
刺激方式:CD3/CD28抗體和IL-2激活48h
病毒:hTLv-GFP慢病毒, 1*108 TU/ml
使用方式:MOI=50
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