漢恒生物研制了一款高效成環過表達載體系統。該載體可用來轉染哺乳動物細胞,可高效表達circRNA並促使其高效成環。
技藝特點:
1)人巨細胞病毒的CMV啟動子可以高效表達目的circRNA;
2)上下遊成環元件Front circ-signal和Back circ-signal可以高效促使表達的circRNA環化;
3)線性化的載體非常方便目的circRNA直接無縫克隆,極大降低無關序列參與成環的幾率。
近幾年的研究表明circRNA富含miRNA結合位點,能在細胞中起到了miRNA海綿(miRNA sponge)的作用。circRNA通過對miRNA的吸附進而解除miRNA對其靶基因的抑製作用,升高靶基因的表達水平,這一作用機製被稱為競爭性內源RNA(ceRNA)機製。研究circRNA的調控機製需要先找到與cirRNA相互作用的miRNA,而荧光素酶報告基因實驗可以用來證明miRNA與circRNA相互作用
1)circRNA過表達和幹擾質粒構建
2)circRNA過表達和幹擾病毒包裝
3)基於慢病毒技藝的穩定細胞系構建效勞
4)circRNA和靶基因的荧光素酶驗證效勞
5)circRNA精確成環驗證
6)ceRNA機製研究效勞
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